結核病的分子實驗檢測技術有哪些?
結核病是一種病因明確、治有辦法的疾病。它一年四季均可發病,15~35歲的人群是該病的高發人群,其潛伏期為4~8周,其中80%發生在肺部,其他部位也可繼發感染。
該病主要經呼吸道傳播,傳染源是接觸排菌的肺結核患者。抗結核藥物具有殺菌、滅菌或抑菌作用,通過化療直接進行抗菌治療效果顯著。
但是,結核病的診斷較為困難。現在,我們可以利用多種實驗室診斷技術來診斷結核病,提高結核病診斷的特異性和敏感性。
其中,分子生物學檢測技術是近年來廣泛應用的一種技術。目前,多種分子生物學檢測方法正在研發和評估之中,其敏感性較高,診斷快速,越來越受到廣大臨床醫生的青睞。
分子實驗檢測的聚合酶鏈反應技術
聚合酶鏈反應(PCR)技術可以將標本中微量的結核桿菌DNA(脫氧核糖核酸)加以擴增。一般情況下,顯微鏡檢查僅能檢測到104~105條菌/毫升,而PCR技術可檢測出1~100飛克的結核桿菌的DNA,相當于1~20條菌/毫升。
但是,在DNA提取過程中容易遭遇到污染等技術原因,從而導致檢驗結果出現假陽性。此外,PCR技術無法區分死菌和活菌。
因此,PCR技術不能作為結核桿菌治療效果的評估依據,以及用于流行病學調查等。
目前,我們在采用PCR技術的同時,可以對結核桿菌耐藥相關基因(如與利福平耐藥相關的rpoB基因、與異煙肼耐藥相關的katG基因等)進行檢測。
分子藥物敏感試驗,也是應用PCR技術進行檢測的,這是對耐藥位點突變的一種檢測方法。它包括直接測序、高分辨率溶解曲線分析、線性探針雜交、基因芯片檢測技術,以及新近在國際上廣泛應用的半巢式實時多聚酶鏈式反應技術等。
其中,全自動封閉操作的半巢式實時多聚酶鏈式反應技術檢測方便,除了可以鑒定結核桿菌之外,還能檢測利福平耐藥的分子標記,被世界衛生組織推薦應用于臨床治療前的快速分子藥物敏感性檢測與菌種的鑒定。
線性探針雜交方法與基因芯片檢測技術比較煩瑣,但是能對一線和二線的抗結核藥物敏感性進行快速檢測,并且能夠應用在非結核桿菌的菌種鑒定上面。
半巢式實時多聚酶鏈式反應技術
全自動封閉操作的半巢式實時多聚酶鏈式反應(XpertMTB/RIF)技術是一種自動化的、以實時定量PCR擴增為基礎的方法,以rpoB基因為靶基因,檢測標本中是否含有結核桿菌以及利福平是否耐藥。整個檢測過程大約需要2小時,并且具有良好的生物安全性和操作簡便性。